Jameson Timba, die de leiding overnam van Citizens Coalition for Change (CCC) nadat Nelson Chamisa in januari was opgestapt, werd samen met andere partijleden gearresteerd in Harare omdat ze een ongeoorloofde bijeenkomst hielden.
Ze werden beschuldigd van samenscholing met de bedoeling om publiek geweld te bevorderen en kregen geen borgtocht van een Magistrates Court.
Amnesty International eiste laat op woensdag hun onmiddellijke vrijlating en beschreef hun voortdurende gevangenschap als "langdurig" en "ongegrond".
"Hun willekeurige, maandenlange opsluiting is een schandaal waar nu een einde aan moet komen," zei Khanyo Farise, Amnesty's adjunct-regiodirecteur voor Oost- en Zuidelijk Afrika.
Hun advocaten beweren dat de politie hen heeft mishandeld, terwijl anderen verwondingen hebben opgelopen.
Een rechter van het Hooggerechtshof zei woensdag dat hij zich niet zou mengen in de beslissing van de lagere rechtbank, met als argument dat de activisten niet "willekeurig" bijeen waren gebracht op de dag van hun arrestatie.
CCC zei dat de beslissing van de rechtbank "onrechtvaardig" was.
"Ondanks het feit dat borgtocht een grondwettelijk recht is, ontzegt het regime onschuldige burgers schaamteloos dit fundamentele recht," zei CCC.
De Zimbabwe Lawyers for Human Rights, een lokale rechtengroep die juridische ondersteuning biedt, zei dat ze door zullen gaan met het onderzoeken van "juridische opties om hun recht op vrijheid te doen gelden".
